下载排行
白叶枯病菌胞内蛋白的提取及电泳分离方法的构建
于海天;阿新祥;刘自单;张恩来;汤翠凤;杨雅云;董超;张斐斐;陈丹;陈丽娟;戴陆园;水稻白叶枯病菌已成为研究植物-病原物互作模式的病菌。要利用蛋白质组学方法深入研究其生物学特性和致病机理,人们面临着其胞内蛋白提取和有效分离方法尚未建立的问题。本文采用TCA丙酮沉淀法和裂解液沉淀法提取白叶枯病菌胞内蛋白,利用两种等点聚焦程序(IEFⅠ,IEFⅡ)进行一向等电聚焦,用三种蛋白上样浓度(400μg,600μg,800μg)进行双向电泳,G-250烤染后,通过Imagemaster软件对双向电泳图谱进行比较分析。结果表明,裂解液沉淀法、等电聚焦程序Ⅱ(IEFⅡ)、600μg上样浓度三者相结合的方法是提取和分离白叶枯病菌胞内蛋白的理想方法,能获得较好的实验效果。该方法的建立为白叶枯病菌蛋白质组学研究奠定基础。
3种接种方法对十字花科黑腐病菌Xcc8004菌株在拟南芥Col-0上致病力的影响
梅雄;李振江;张慧;唐纪良;唐东阶;十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovar campestris,Xcc)是引起十字花科植物黑腐病的病原菌,也是研究寄主与病原微生物相互作用分子机理的模式菌之一。Xcc可以感染白菜、萝卜和甘蓝等十字花科农作物,也可以感染重要的模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)。由于拟南芥的全基因组测序已经完成,因此,拟南芥是研究寄主植物对Xcc浸染的防卫反应的分子机理的最理想的寄主材料。但是,到现在为止,一套完善的在拟南芥上进行Xcc致病检测的实验系统还没有建立。为此,本研究比较了"叶片压渗法"、"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"这3种常用的病原细菌接种方法对Xcc的实验室菌株8004(以下简称Xcc8004)在哥伦比亚生态型拟南芥(A.thanliana ecoype Colombia0,Col-0)上的致病力的影响。结果发现,在拟南芥Col-0叶片上用"叶片压渗法"接种Xcc8004可以引起明显致病症状,而用"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"接种均不能引起病症。这一结果说明,不同的接种方法的对Xcc在拟南芥上的致病力有很大的影响。因此,要在拟南芥Col-0上进行Xcc8004的致病力检测,本研究建议采用"叶片压渗法"而不用"剪叶法"和"叶片中脉穿刺法"。此外,本研究还建立了一套简易的拟南芥试验用苗的栽培方法。
温针灸联合耳针法治疗肥胖并发高血脂症的疗效观察
柳丽;高建芸;为探究温针灸联合耳针法对治疗肥胖并发高血脂症的疗效以及对患者内皮功能、血清脂联素(APN)水平、瘦素(LP)水平的影响。本研究选取河北省中医院收治的120例肥胖并发高血脂症患者(2015年1月至2016年1月)作为研究对象,采用随机数字表法进行分组,分别分为联合组、对照组各60例,进行为期3个月的治疗干预,两组均采取温针灸结合常规饮食、运动及降血脂疗法,联合组额外采取耳针疗法,并对所有受试者治疗干预前后的身体质量(BMI)指数、体脂率、肥胖度、血脂指标、血管内皮功能、血清脂联素(APN)水平、瘦素(LP)水平进行检测。研究发现,治疗前,两组患者的各项检测指标均无显著性差异(p>0.05);治疗后,两组的体脂率、肥胖度无显著性差异(p>0.05),联合组的身体质量(BMI)指数、总胆固醇(TC)水平、甘油三酯(TG)水平、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平、内皮素-1(ET-1)水平、血清脂联素(APN)水平均低于对照组(p<0.05),联合组的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平、血液一氧化氮(NO)水平、瘦素(LP)水平、血流介导的肱动脉内皮依赖性血管舒张(FMD)均高于对照组(p<0.05)。研究数据表明温针灸联合耳针法对治疗肥胖并发高血脂症有较好的疗效,有利于改善患者的内皮功能、降低血脂指标。本研究为温针灸联合耳针疗法治疗肥胖并发高血脂症提供医学理论依据。
不同水稻品种积累镉的差异及其动态变化
王英;李正文;贺紫荆;采用盆栽试验,研究了广西4个水稻(Oryza sativa)品种在红壤和水稻土上积累镉的差异及其动态变化。结果表明,红壤与水稻土相比,更利于镉向水稻体内转移;水稻对镉的积累有明显的基因型特征,籽粒中镉含量随镉浓度加大而显著提高,在外加镉浓度为2.0 mg/kg条件下,红壤土栽培的水稻籽粒镉含量超过了0.2 mg/kg食品卫生标准;不同水稻品种对镉的积累存在显著差异,4个品种吸镉量随取样时期呈现先升高后降低的趋势,特优1012和培杂泰丰镉积累量高于其他两个品种。因此,在污染土壤上宜选种食用部位重金属积累低的水稻品种,以减少人类吸收重金属的风险。
烟叶表面微生物群落结构鉴定及其产酶分析
陈小敏;林影;梁书利;为分析"黑老虎"烟叶表面微生物群落及其产酶情况,基于PE:2×300 bp测序策略利用Illumina Miseq平台对以不同调制方式处理的"黑老虎"烟叶进行16S r DNA高通量测序,并用水解圈平板分析微生物产木聚糖酶、纤维素酶、果胶酶、蛋白酶和淀粉酶的能力。3个样品共获得346 060条有效序列,组装成303个、228个和196个OTU。主要细菌类群为厚壁菌门(Firmicutes)下的芽孢杆菌(Bacillus)、变形菌门(Proteobacteria)下的假单胞菌(Pseudomonadaceae)及放线菌门(Actinobacteria)下的微球菌(Micrococcaceae)。85株分离的细菌多数能产多种酶,产果胶酶和木聚糖酶能力较强,产蛋白酶和淀粉酶次之,而产纤维素酶能力稍弱。芽孢杆菌是"黑老虎"烟叶表面最主要的菌群,而假单胞菌可能是刷米浆调制工艺赋予烟叶独特风味的重要菌群。所分离出的产酶微生物在烟草加工上有作为微生物菌剂实现提质增香的应用潜力。
两种莪术类药用植物姜黄素提取物对小鼠抗氧化活性研究
延琪瑶;闫朝阳;王浩峰;童珊珊;邓家彬;杨瑞武;本研究通过对两种莪术类药用植物姜黄素提取物,结合3种姜黄素的含量分析其对小鼠的抗氧化药效。通过高效液相色谱法测定总姜黄素提取物中3种姜黄素的含量。选取48只雌性小鼠,随机分成4组分别灌胃提取液(含1组喂基础饲料)。正常饲喂14 d后,小鼠采血测定SOD (超氧化物歧化酶)、CAT (过氧化氢酶)、GSH-Px (谷胱甘肽过氧化物酶)、XOD (黄嘌呤氧化酶)及NO (一氧化氮)、MDA (丙二醛)含量。结果表明,经姜黄素提取液灌胃的小鼠,SOD、CAT、XOD活性升高,NO含量下降;GSH-PX活性普遍升高,MDA含量普遍下降;2种莪术抗氧化活性具有差异性,浓度或含量与抗氧化活性不具有正相关关系;产地不同,也是影响体内抗氧化活性的因素之一。
不同碳源对普通小球藻和粘红酵母共培养产油脂的影响
刘方舟;任洪艳;陈红芬;邰勇;阮文权;微生物碳水化合物极具制备生物燃料的潜力,适宜的培养方法是很重要的。本研究以普通小球藻和粘红酵母作为培养对象,对比单独培养和共培养的生物量与油脂产量,考察不同碳源初始质量浓度(葡萄糖:2 g/L, 5 g/L, 7 g/L, 10 g/L;甘油:1 g/L, 3 g/L, 5 g/L, 7 g/L;乙酸钠:2 g/L, 5 g/L, 7 g/L, 10 g/L)对菌藻共培养生长和油脂积累的影响。结果表明,3种碳源下菌藻共培养的生物量和油脂产量均高于单独培养。葡萄糖浓度7 g/L,甘油浓度5 g/L和乙酸钠浓度10 g/L为最佳碳源浓度,其中外加碳源葡萄糖可促进微生物的快速生长和油脂积累,甘油组表现出与葡萄糖组相同的碳源转化为生物量和油脂的能力,为微生物产生物柴油工业化提供适宜的碳源可能。利用气相色谱对油脂进行脂肪酸成分分析,发现3种碳源共培养获得的脂肪酸成分皆为C16～C18,符合生物柴油对碳链长度的要求。本研究通过共培养策略提高了微生物的生物量和油脂产量,优化了碳源浓度,为微生物产油脂体系提供参考。
贵州喀斯特土壤中产脲酶细菌的分离和鉴定
沈琼雯;吴艳柳;高珺;周燕;李有志;脲酶具有解尿素的能力并为植物生长提供氮源。脲酶产生微生物是土壤中脲酶的主要生产者,属于功能有益种群微生物,因此,整理脲酶产生菌的名录具有实际意义并且很有必要。本研究分离鉴定出了来自贵州喀斯特地貌土壤中的23个属的已知的79种产脲酶的细菌,并对其中的21种细菌菌株的生理生化特性进行了系统鉴定。也发现了11个新记录的产脲酶的未知细菌种,并提供了相关菌种/菌株名录。这为深入研究该类菌的植物促生功能、相关功能机制奠定了良好的基础。据我们所知,这是首次对贵州喀斯特地貌土壤中脲酶产生细菌资源的研究整理。
小鼠颅骨成骨细胞的分离培养及生物学鉴定
王钦;李辉;张磊;覃琦丽;薛林涛;滕维中;石德顺;对小鼠成骨细胞的体外分离培养方法进行了摸索,并对其生物学特性进行了鉴定。手术法分离新生小鼠颅骨骨片,用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)预消化20~30 min,而后用0.08%胶原酶+0.05%胰蛋白酶+0.004%EDTA的复合酶多次消化(每次10 min)收集细胞,然后接种于细胞培养瓶中进行培养,并通过苏木精-伊红(HE)染色、BCIP/NBT Kit碱性磷酸酶(ALP)染色、VonKossa法钙结节染色和四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法对培养细胞进行生物学鉴定。结果发现,分离得到的细胞92%为存活细胞,差速贴壁培养后可筛选得到高纯度的成骨细胞,原代培养8 d后可形成单层细胞,传代培养67 d后可形成单层细胞。这些细胞有ALP活性,并具有体外钙化能力。结果表明,本研究建立的小鼠成骨细胞分离培养与鉴定方法是可行的。
球孢白僵菌毒素对家蚕糖代谢水平的影响
耿涛;赫荣帆;潘波;武华周;王娜玉;郭锡杰;王树昌;为明确球孢白僵菌毒素对宿主昆虫糖代谢水平的作用,本研究检测了家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射球孢白僵菌毒素之后组织中海藻糖和糖原含量的变化,以及糖代谢相关基因表达水平的变化;分析了注射毒素和添食海藻糖之后对家蚕幼虫存活率的影响、以及添加毒素之后对BmN细胞的损伤作用。结果表明,家蚕幼虫感染球孢白僵菌和注射毒素后海藻糖和糖原含量显著降低;Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达,而糖代谢酶系基因则显著下调表达。注射毒素显著降低家蚕5龄幼虫的存活时间,而补充海藻糖能够延长家蚕幼虫的存活时间。添加毒素能够使家蚕BmN细胞发生凝集作用而最终崩解死亡,并诱导Bombyxin A2和BmIBP2基因显著上调表达以及糖代谢酶系基因显著下调表达。以上结果说明,球孢白僵菌可能通过分泌毒素,作用于家蚕类胰岛素信号通路,调节家蚕自身糖类物质的代谢与合成,破坏家蚕能量代谢与储存平衡,引起家蚕组织细胞凋亡并最终导致家蚕死亡。本研究结果对农林害虫的生物防治、家蚕等经济昆虫僵病防治技术的研究以及球孢白僵菌毒素用于新型降糖药物的筛选和中药僵蚕的开发利用均具有重要意义。