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菘蓝CYP83A1基因的克隆、表达特性及原核表达分析
赵桂红;张妮妮;高帅帅;陆苗;王晶;张天翼;李焘;本研究对菘蓝CYP83A1基因进行了克隆、表达特性及原核表达研究。结果表明,IiCYP83A1基因组DNA全长为1 622 bp,包含2个外显子和1个内含子;cDNA全长为1 512 bp,编码503个氨基酸。IiCYP83A1编码的蛋白包含2个跨膜结构域,无信号肽,主要定位于内质网膜,属于亲水性蛋白,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,与萝卜、欧洲油菜、西兰花和芜菁等植物的CYP83A1蛋白具有较高的同源性。qRT-PCR结果表明,IiCYP83A1在不同组织中的表达具有显著性差异,表现为茎>叶>果>花和根;在幼苗期、生长期和花期的表达量显著高于萌芽期;茉莉酸甲酯(MeJA)和伤害处理能够显著促进该基因的表达,而低温(4℃)和水杨酸(SA)处理则对其表达具有一定的抑制作用。将克隆到的IiCYP83A1基因连接到表达载体pET-28a上,构建原核表达载体pET-28a-IiCYP83A1并对其进行原核表达。SDS-PAGE结果显示,在E.coli BL21中成功诱导表达了CYP83A1蛋白,与预期蛋白分子量大小一致。本研究结果可为进一步研究IiCYP83A1的功能提供实验依据。
鸡球虫活疫苗类型及其研究进展
陈进喜;陈汉忠;谢婷;何木荣;韦尧宝;曾晓飞;随着人们对绿色安全食品需求的重视,对鸡球虫病寻求新的预防方法成为当今研究的热点,而球虫活苗与化学药物相比,除了具有防治疾病作用以外,还具有毒副作用小、无抗药性、改善鸡的肉蛋品质等优点。本文对鸡球虫活疫苗的研究状况、免疫原理及研究方法等方面进行了综述。
盐碱土壤与非盐碱土壤微生物的抗盐碱特性
石伟;高野哲夫;柳参奎;为了比较分析盐碱土壤与非盐碱土壤微生物资源抗盐碱性差异,本研究利用含有不同浓度Na2CO3、NaHCO3和pH的培养基对盐碱土壤和非盐碱土壤细菌进行培养计数。结果显示:非盐碱土壤出菌数量随Na2CO3、pH和NaHCO3浓度升高而下降,盐碱土壤细菌出菌数量随着Na2CO3、pH和NaHCO3浓度升高先是升高然后下降,最高值分别出现在200mmol/LNaHCO3、50mmol/LNa2CO3和pH9.0的分离平板上。此外,高Na2CO3、pH和NaHCO3浓度的平板中盐碱土壤出菌数量远高于非盐碱土壤;以上结果可见,耐盐碱细菌资源主要集中分布在盐碱土壤中,在非盐碱土壤中虽有分布,但是仅占有很少一部分。
6种植物提取物对荔枝霜疫霉的抑制作用
汪静;孙进华;张新春;高兆银;王家保;采用菌丝生长速率法测定了双氢青蒿素、厚朴酚、辣椒碱、青蒿琥酯、蛇床子素以及蒿甲醚6种植物提取物对32个采自广东,福建以及海南的荔枝霜疫霉菌菌株的抑制作用,以期为后期植物源农药的开发提供基础。结果显示,6种植物提取物对供试的32个菌株均有一定的抑制作用,以厚朴酚的抑制作用最好,双氢青蒿素次之,其它4种植物提取物的抑制作用相对较差,但均未出现不抑制现象。6种植物提取物对荔枝霜疫霉菌均有用于开发防治荔枝霜疫霉的植物源农药的潜力,以厚朴酚最佳。
哺乳动物精原干细胞诱导分化研究进展
谢龙;杨小淦;陆阳清;许惠艳;卢克焕;开展哺乳动物精原干细胞(spermatogonial stem cell,SSC)诱导分化研究并建立相应技术体系不但具有重要的科研价值,也存在巨大的应用潜力。目前在二维(2D)培养系统、三维(3D)培养系统或进行活体移植都曾有成功诱导生成精子的报道。本文着重对SSC在这三种诱导分化体系下所取得的研究进展进行综述,分析其优缺点,并探讨了SSC诱导分化研究未来的发展方向。
斑马鱼pax2a(-3.1 kb):eGFP转基因品系的构建
何贤;卢淑娴;朱世诚;王飞;阮华;为了更好地了解脊椎动物肾脏的早期发育,本研究利用斑马鱼这一研究脊椎动物器官发育的理想模式生物,通过构建肾脏特异性pax2a荧光标记转基因品系以实现实时在体地观察斑马鱼前肾的发育过程。我们分析了斑马鱼pax2a基因的启动子,扩增出其翻译起始位点上游3.1 kb的基因组DNA,利用Tol2转座子系统,经胚胎显微注射及三代筛选,成功构建了一个稳定的pax2a(-3.1 kb):eGFP转基因鱼品系。此转基因品系的绿色荧光蛋白在3体节时期就可以标记出中间中胚层,并在后续体节时期的中间中胚层前端(第3体节至第5体节对应的部分),及24 hpf的肾管前端和中段表达,基本模拟了pax2a在斑马鱼早期前肾发育中的时空表达模式。本研究所获得的pax2a(-3.1 kb):eGFP弥补了已有pax2a转基因品系中报告基因无法准确标记出中间中胚层和前肾管前端的缺陷,是研究斑马鱼前肾早期发育的良好材料。
绵马贯众多糖超声提取工艺优化及抗氧化活性分析
李佳颖;高誉;刘红;肖羽;万岚凤;赵雨晴;胡超;袁明;绵马贯众是中国传统常用中药,本研究以温度、时间、超声功率、液料比为影响因子,多糖得率为评价指标,通过响应面法优化超声辅助提取绵马贯众多糖的工艺条件,同时测定其基本理化性质及抗氧化活性。研究结果表明,绵马贯众多糖的最佳提取工艺条件为:温度64℃、时间60 min、超声功率210 W、液料比27 mL/g。此时多糖得率为9.57%,与预测值接近。理化性质分析表明绵马贯众多糖为含少量蛋白的酸性多糖。体外抗氧化研究表明绵马贯众多糖具有很强的DPPH自由基清除活性,IC50值为0.29 mg/mL;较好的羟基自由基清除活性,其IC50值为1.10 mg/mL;对DNA的氧化损伤有显著的保护作用。绵马贯众多糖可以作为一种潜在的抗氧化剂应用于食品和化妆品等领域。
重组蛋白G基因工程菌高密度发酵及其分离纯化
张虎成;张征田;杨国伟;王晓杰;范海涛;杨军;蛋白G是链球菌细胞壁蛋白,能和哺乳免疫球蛋白结合,在分离抗体研究方面具有重要的作用。重组蛋白G(SPG)基因重组工程菌高密度发酵工艺和SPG分离纯化研究工艺直接影响了蛋白G的应用。通过一级、二级种子培养,转接到发酵罐及控制补料浓度、加入IPTG等条件,考察了接种量、氧气、pH、培养方式等发酵工艺,以及超声破碎菌体、镍柱亲和层析、Sephadex G-25凝胶过滤层析和DEAE-FF离子交换层析分离提取SPG工艺,并用SDS-PAGE检测分离提取效果。高密度发酵能得到至少80g/L的菌体,最高达到150g/L的菌体,每升发酵液可得到1g的SPG。本生产工艺可得到高浓度和高产量的SPG。
产微生物絮凝剂的菌株筛选、鉴定及发酵条件优化
章素平;翟永丽;刘晓侠;王玉洁;尤忠毓;微生物絮凝剂是一类新型的水处理制剂,因其具有高效、无毒、易降解等特点,已成为水处理剂开发的研究热点。为了扩大微生物絮凝剂的种类,本研究从活性污泥和土壤样品中筛选絮凝剂产生菌,最终获得一株具有絮凝活性的菌株,通过16S rDNA鉴定,该菌株为蒙氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii),因此命名为P. monteilii YR-1。利用单因素实验和正交试验对该菌株的发酵条件进行了优化,其最佳碳、氮源分别为25 g/L葡萄糖和2 g/L复合氮源(酵母浸粉:尿素:硫酸铵=5:5:2),培养基初始pH值为10,培养温度为28℃,发酵时间为72 h。在最佳培养条件下,其发酵液的絮凝率从37.68%提高到63.52%。这是关于蒙氏假单胞菌产絮凝剂的首次报道。
克拉玛依石油污染土壤微生物群落结构及其代谢特征
吴盼云;晁群芳;赵亚光;徐苗;肖路梅;马腾飞;为了分析克拉玛依油区内土壤中正构烷烃含量间的差异,微生物群落生理多样性、微生物代谢活性在不同石油污染梯度土壤中的变化规律。本研究采用GC、平板稀释法、Biolog微平板技术探讨了土壤微生物群落特征在3种不同污染程度下的变化情况。研究表明,石油污染土壤烷烃含量与微生物代谢活性呈显著负相关(r=-0.783, p<0.05)。随着石油污染程度增加微生物数量呈下降趋势,不同石油污染土壤中细菌数量占决定优势,细菌>真菌>放线菌。不同石油污染土壤微生物群落对6大碳源的利用体现出差异。主成分分析(PCA)表明,清洁土壤与石油污染土壤对底物利用有明显差异。石油污染严重土样碳源利用率为"酯类>酸类>胺类>氨基酸类>单糖/糖苷/聚合糖类>醇类"。本研究成果为后期修复污染土壤时调整投入的碳源底物等提供科学帮助。