下载排行
聚乙二醇细胞融合技术在牛手工体细胞克隆中的应用初探
谭世俭;田国富;谢忠君;刘继龙;石德顺;本研究分3个实验。实验1对比了不同浓度的离子霉素对牛去透明带卵母细胞孤雌激活的效果;实验2比较了手工半卵切割法去核与显微半卵切割法去核的效果;实验3对聚乙二醇(PEG)细胞融合技术在牛手工体细胞克隆的应用进行了初步探讨。结果表明,对于去透明带牛卵母细胞孤雌激活,离子霉素浓度为2.0μmol/L组的激活效果最好,其囊胚发育率(29.4%)极显著地高于浓度为5.0μmol/L的对照组和0.5μmol/L组(囊胚率分别为8.3%和9.4%,P<0.01);采用半卵切割法去核,手工切割的半卵存活率(85.6%)与显微操作(90.3%)差异不大,切割速率(约100枚卵/h)相仿。对双半卵与体细胞进行同步融合处理时,应用50%浓度的PEG融合率(39.3%)极显著好于45%、55%和60%的PEG(融合率分别为0%、16.2%和5.3%,P<0.01)。
铁皮石斛GRAS转录因子家族基因SCL3克隆及表达分析
阎波;刘思思;陈娟;郭顺星;GRAS家族是一类植物特有的转录调控因子,参与调控植物生长发育及抵御逆境胁迫,并且在赤霉素(gibberellins, GAs)信号转导过程中具有重要作用。本研究采用RT-PCR结合RACE方法从铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)原球茎中克隆到了一个转录因子GRAS家族基因SCL3 (scarecrow-like 3)并对其进行了表达分析。该基因cDNA序列全长2 278 bp,命名为DoSCL3 (GenBank注册号:MG252261),其编码425个氨基酸,分子量为47.88 kD,等电点(PI)为6.21。DoSCL3基因编码的蛋白不含跨膜域和信号肽,具有GRAS转录因子家族特有的保守结构域(22～422);多序列比对表明,DoSCL3与小兰屿蝴蝶兰的SCL3蛋白高度同源(相似性达到83%),同时进化树分析结果显示其与小兰屿蝴蝶兰亲缘关系非常相近。qRT-PCR实验结果显示,DoSCL3基因在铁皮石斛种子共生萌发中随着萌发进程的变化(1～3级,萌发至原球茎阶段)其表达量逐渐升高,并且在种子萌发至2级时,共生萌发组表达量显著高于无菌萌发组(为无菌组2.2倍),表明DoSCL3在兰科药用植物铁皮石斛种子共生萌发中菌根共生关系的建立过程起到重要的调控作用。
青花菜ProDH基因的克隆及功能鉴定
杨鹏;刘莉莎;温常龙;赵立群;赵冰;郭仰东;脯氨酸是水分胁迫植物中最常见的渗透保护物质之一,脯氨酸脱氢酶(ProDH)是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶,构建RNAi表达载体转化青花菜可以抑制脯氨酸分解提高其抵抗干旱胁迫和盐胁迫的能力。本研究利用同源重组和RACE技术克隆青花菜脯氨酸脱氢酶基因(ProDH),以酶切、连接的方法利用载体pFGC1008构建植物RNAi表达载体pFGC-PDHi。序列分析表明,本文首次克隆了1595bp的青花菜脯氨酸脱氢酶基因cDNA全长,该序列编码498个氨基酸;序列比对发现该核酸序列与拟南芥、甘蓝型油菜、芜菁分别有83.26%、89.07%和97.73%的同源性,其氨基酸序列和拟南芥、甘蓝型油菜、芜菁分别有89.78%、91.38%和98.80%的同源性。测序和酶切鉴定表明青花菜ProDH基因RNA干扰表达载体已经构建成功,并将其转化青花菜得到转化株,经PCR检测,转化株均为阳性株,证明干扰载体的T-DNA区已经成功地整合到了青花菜基因组中。研究还发现在外源的L-脯氨酸存在时,转化株的脯氨酸脱氢酶的活性受到了明显的抑制。本研究为青花菜的抗旱育种提供了非常有价值的新种质材料。
苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白VIP3研究进展
韩丽珍;刘辰;谢柳;李有志;营养期杀虫蛋白(vegetative insectcidal protein,VIP)是由苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)在营养生长指数中期至稳定期期间分泌产生的一类新型杀虫因子,分为VIP1、VIP2和VIP3三种,以VIP3的研究最为深入。VIP3A对鳞翅目害虫具广谱杀虫活性,可作用于敏感昆虫中肠上皮细胞刷状缘膜囊致离子通道的形成,杀虫活性达纳克级水平。利用BtICPs不同启动子与vip3基因重组可提高VIP3蛋白的表达量和稳定性。转vip3基因植物也已有构建成功的报道。本文从VIP3的类型和杀虫活性、作用机理、vip3基因的定位和分离、vip3基因重组和转vip3基因植物等方面详细介绍了VIP3近十年来的研究进展。
鲜牛奶与豆浆的氨基酸营养比较
郑比杏;周云;用氨基酸自动分析仪分析了鲜牛奶和5%豆浆的蛋白质氨基酸组成及含量。必需氨基酸(含胱氨酸和酪氨酸)占氨基酸总量牛奶为45.47%,豆浆为37.93%;必需氨基酸指数(EAAI)牛奶为89.72,豆浆为74.92;赖氨酸含量牛奶为479mg/gN,豆浆为351mg/gN;第一限制氨基酸均为蛋氨酸+胱氨酸,其含量鲜牛奶为208mg/gN,豆浆为190mg/gN;氨基酸分(AAS)和化学分(CS),鲜牛奶为0.95和0.54,豆浆为0.86和0.49。
7种防霉剂对烟仓霉变微生物的抑制作用及防霉效果的初步研究
朱桂宁;黄福新;黄思良;晏卫红;周兴华;唐毓新;陈永惠;劳道辉;测定了纳他霉素制剂等7种防霉剂对溜曲霉等10种引起广西仓储烟叶霉变的主要微生物的抑制作用,选出4种防霉剂进行了烟叶防霉试验。结果表明,在烟叶含水量为18%时,纳他霉素制剂2 000 m g/kg、富马酸二甲酯2 000 m g/kg和山梨酸钾2 000 m g/kg能有效抑制霉菌的生长繁殖,防止烟叶发霉。但在烟叶含水量为25%和35%时,防霉剂的防霉效果并不理想,这表明防霉剂的使用可以作为烟叶防霉的一种辅助手段。
NLRC5蛋白可负调控NF-kB和Ⅰ型IFN信号传导途径
周一奇;<正>2010年4月30日,美国休斯敦贝勒医学院病理学与免疫学系细胞和基因治疗中心、南京大学生命科学院及浙江大学医学院等处的研究人员发现了一个能有效抑制机体的天然免疫系统的蛋白分子:NLRC5蛋白。NLRC5可能为未来提高微生物感染和免疫炎症相关的疾病的免疫力提供了一个有效的治疗靶标,这一研究成果公布在最新一期的《Cell》杂志上。
武夷菌素对土壤微生物群落及抗生素抗性基因的影响
施李鸣;葛蓓孛;刘炳花;麻金金;韦秋合;姜明国;张克诚;抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes, ARGs)作为一种新型环境污染物近年来受到广泛关注。目前关于抗生素的环境污染研究主要集中于医疗和养殖业,对植物保护领域的农用抗生素环境污染研究很少。武夷菌素是一种环保、高效、广谱的农用抗生素,在农业生产中得到了广泛应用,对农作物真菌性病害具有良好的防治效果。本研究分别选取了未使用武夷菌素和使用武夷菌素的蔬菜大棚中的土壤,通过高通量测序分析了土壤中微生物群落结构,发现两份土壤中主要的微生物群落种类没有发生明显改变,但是优势菌群的丰度有显著差异。通过荧光定量PCR技术,对18个典型的抗生素抗性基因进行了检测,发现aadA、aac(3)-Ⅱ、strA、strB、aacA4、tetX、sulI和intI1 8个基因在两份土壤中的绝对含量和丰度均有显著差异,表明武夷菌素对土壤中微生物的群落结构及抗生素抗性基因的绝对含量和丰度均会造成一定影响。本研究为评估武夷菌素的环境安全性及合理正确使用武夷菌素提供了理论依据,也为其它农用抗生素的相关研究提供了借鉴。
中国沙棘SSR-PCR反应体系的优化及引物开发
刘青青;马玉花;李雄杰;马福林;高佩;马亚琼;杨开宇;本研究旨在建立适宜中国沙棘(Hippophae rhamnoides subsp.sinensis)SSR-PCR的反应体系，以期为中国沙棘遗传多样性分析、种质资源鉴定等相关研究奠定基础。本研究以来自青海不同地区的中国沙棘野生种的150个植株为试验材料，采用单因素试验和L16(45)正交实验对影响中国沙棘SSR-PCR反应体系的因素进行优化。正交试验极差分析和方差分析结果均显示，影响中国沙棘SSR-PCR反应体系扩增效果的5个因素的主次顺序为缓冲液>dNTPs>引物>模板DNA>Taq DNA聚合酶。结合直观分析的评分结果，确定适用于中国沙棘的最佳SSR-PCR反应体系为0.8 U Taq DNA聚合酶、 2 mmol/L缓冲液、 1.5 mmol/L dNTPs、 0.5μmol/L引物、 25 ng模板DNA,加双蒸水至20μL;筛选出15对条带清晰、多态性丰富且重复性好的SSR引物。本研究可为中国沙棘的亲缘关系鉴定和分子遗传育种等研究提供科学依据。