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m6A相关基因在宫颈癌中的表达及临床分析
许修颖;龚荣府;杨娉娉;方文;为探讨宫颈癌(cervical cancer, CC)中N6-甲基腺苷(m6A)修饰相关基因的表达及临床意义，从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中下载3个宫颈癌mRNA表达相关的数据集，筛选出m6A相关基因(METTL3、METTL14、METTL16、WTAP、KIAA1429、RBM15、ZC3H13、FTO、ALKBH5、YTHDF1/2/3、YTHDC1、HNRNPA2B1、HNRNPC)在宫颈癌中的表达情况。对RBM15进行生物信息学分析，利用UALCAN分析RBM15表达与临床病理特征的关系，LinkedOmics数据库用于RBM15相关共表达基因分析，STRING构建蛋白质相互作用网络，利用Kaplan-Meier Plotter数据库分析RBM15与宫颈癌患者预后关系。GEO数据库差异分析结果显示RBM15在宫颈癌中的表达呈上升趋势(P<0.01),UALCAN分析RBM15表达与多个临床病理特征有关(P<0.05),LinkedOmics分析结果显示有460个基因与RBM15呈正相关，750个基因呈负相关(FDR<0.05),在STRING构建了RBM15蛋白质相互作用网络，生存分析结果显示RBM15基因低表达组的宫颈癌中位总生存时间高于高表达组的，但差异无统计学意义(HR=1.32,P=0.24)。本研究筛选了m6A相关基因在宫颈癌中的差异表达情况，并对RBM15进行生物信息学的分析，为RBM15在宫颈癌中的作用分析提供新的思路。
植物膜联蛋白(Annexin)的研究进展
李瑞梅;王雨晴;张帆;袁帅;耿梦婷;姚远;刘姣;段瑞军;符少萍;胡新文;郭建春;植物膜联蛋白属于D类膜联蛋白是在植物中的一类钙和磷脂结合蛋白。植物膜联蛋白约占植物总蛋白含量的0.1%,与动物膜联蛋白在分子量、氨基酸序列及Ca2+与磷脂结合的能力上,都拥有较高的同源性。植物膜联蛋白的亚细胞定位具有多样性,与胞质Ca2+浓度、细胞所处pH、植物组织及外界环境有关。植物膜联蛋白的表达具有组织特异性,且受到各种生物及非生物因子在转录及翻译后水平的调控。植物膜联蛋白具有与植物肌动蛋白结合、参与钙离子通道形成、膜动力学功能、具有ATPase/GTPase及过氧化物酶活性等生物功能,在植物生长发育及响应逆境胁迫过程中起重要作用。本综述从植物膜联蛋白的进化、结构、亚细胞定位、表达调控和生物学功能方面进行综述,旨在为深入研究植物膜联蛋白的功能及其应用提供参考。
人胰岛素在乳腺细胞和组织中的高效生产
杨喜;王显新;吴晨辰;杨磊;武丽琼;王晓云;李少杰;吴侠;哺乳动物乳腺作为机体最大的分泌器官,被誉为是生物合成活性蛋白质和蛋白类药物的最有利场所。目前已有多个活性蛋白可以通过乳腺被高效的生产。然而,利用乳腺生产内分泌蛋白的效率却始终较低。乳腺中所含蛋白修饰酶种类的限制,对于内分泌蛋白的翻译后修饰存在一定的局限性。本研究以人胰岛素原基因为研究对象,通过基因工程技术将人胰岛素原基因中的两个内肽酶Ⅱ(endoproteasesⅡ,PC2)切割位点分别转变为乳腺可识别的内肽酶Ⅰ/Ⅲ(endoproteasesⅠ/Ⅲ,PC1/3)切割位点,构建乳腺特异表达载体,p BC1-663、p BC1-662和p BC1-792,并在乳腺细胞和小鼠模型中分别比较突变的人胰岛素原的表达对于胰岛素合成和分泌的影响。在细胞水平分析显示,表达突变型胰岛素原的细胞和培养液中的胰岛素含量显著高于对照组。进一步检测转基因小鼠泌乳期乳腺组织中胰岛素的含量显示,突变型人胰岛素原能够高效的在乳腺组织中合成人胰岛素,并高效的分泌到乳汁中。综上所述,将人胰岛素原蛋白内的蛋白酶切位点转变为乳腺内特有蛋白酶的酶解位点后,能够显著提高人胰岛素在乳腺细胞和组织中的合成和分泌效率。
海南省香蕉枯萎病病原菌的分离鉴定及1号、4号小种的生物学特性
林妃;高剑;曾涛;曾会才;香蕉枯萎病是目前国内和世界很多地区香蕉种植区的一种毁灭性病害,目前尚未找到有效的防治方法。本文采集了海南省不同地区香蕉枯萎病的病原菌,通过经典病理学与分子生物学的方法进行了鉴定,此外还优化了快速检测的方法。结果表明,通过接种巴西香蕉和粉蕉进行致病性检测以及分离菌rDNA-ITS测序结果,明确鉴定出供试的香蕉分离菌株为4号生理小种,粉蕉分离菌株为1号生理小种。为了对1号、4号生理小种有更多的了解,本文还对1号、4号小种菌株生物学特性进行了测定,确定了影响菌丝生长的最佳条件。结果显示,pH5时最适合1号、4号生理小种的菌丝生长,适合菌丝生长的温度为19～28℃之间,温度达到37℃时菌丝不能生长,碳源对菌丝的生长影响不大。这些方法和数据可以有利于田间香蕉枯萎病病害的检测和最终确定,生物学特性的测定可以为耕作技术的改进和农药的研发提供参考依据。
抗菌肽及其在贝类中的研究进展
杨婷婷;叶梦晓;尤仲杰;林志华;包永波;贝类缺乏特异的免疫系统,主要由细胞和体液免疫系统抵抗外界病菌的侵袭。抗菌肽是其中一种重要的免疫因子,由于抗菌肽特殊的结构和作用机理,不会像其它抗生素使病菌产生耐药性,因此具有广阔的应用前景。本文主要介绍了抗菌肽的特点、作用机理及贝类抗菌肽的研究进展、应用前景和存在的问题。
酵母高效克隆表达T载体pYES2-T的构建及应用
曹雪松;曹高燚;武俊杰;詹瑶;丁博;李明;谢晓东;为了在酵母中高通量、高效率地对外源基因进行克隆和表达,本研究以酵母表达载体pYES2为基础,构建高效克隆表达T载体。pYES2是酿酒酵母的一种高效表达载体,在其多克隆位点处设计插入XcmⅠ-Intron-XcmⅠ片段,同时将其载体中URA3基因中原有的XcmⅠ酶切位点进行定点突变,构建出pYES2-T酿酒酵母高效表达T载体。利用XcmⅠ酶切载体pYES2-T,使其产生两个突出的T末端,一方面可以通过PCR产物加A的方式直接进行TA克隆;另一方面可在半乳糖诱导启动子的调控下,对TA克隆后的外源基因在酵母中诱导表达。利用该系统高通量地对人工合成耐盐系列基因NLEAs进行筛选,研究结果表明,该系统可以在酿酒酵母中一步式完成片段克隆及耐盐基因的筛选。本研究构建的酵母表达T载体使用方便、效率高、成本低,应用前景广阔。
番茄水通道蛋白基因家族的生物信息学分析
李菲;何小红;李育柯;乙引;植物水通道蛋白不仅仅在根系输送水分,而是具有底物和细胞定位的多样性的基因家族,因而对植物生理和发育过程,包括种子发芽、侧根发生、碳固定和营养吸收等都有重要的贡献。番茄基因组中共有44个水通道蛋白基因。这些基因可分为TIP、PIP、NIP和SIP 4个亚家族。这4个亚家族具有不同的功能和亚细胞定位。在番茄十号染色体水通道蛋白聚集位点上的5个基因与一号染色体上的一个基因是直系同源水通道蛋白,相似度都很高,同属于PIP亚家族。番茄水通道蛋白大多在根部表达量较高,在茎、叶、花等部位表达较低。不过Solyc03g096290.2.1和Solyc01g094690.2.1基因在花中表达量最高。此外,有个别基因表达量稳定在较高的水平,包括Solyc06g074820.2.1和Solyc08g081190.2.1。这些基因的功能可能不仅是吸收和转运水分,是否有其他的转运底物,在植物抗逆和发育过程中是否有调控作用,是下一步研究的重点。番茄全基因组中的水通道蛋白进行检索和分析,对番茄分子生物学研究和种质改良都有重要的意义。
烟草赤霉素2-氧化酶基因NtGA2ox1的克隆、表达及亚细胞定位分析
姜山;代常波;孙玉合;赤霉素2-氧化酶(GA2ox)通过2-β-羟基化作用产生失活的赤霉素,进而调节植物体内的赤霉素的活性水平。前期,本研究在烟草侧枝发育突变体转录组数据中,发现一个赤霉素2-氧化酶基因,其表达水平与野生型相比存在显著差异,命名为NtGA2ox1。为了更好地研究该基因在烟草侧枝发育中的作用,本研究从普通烟草中分离克隆了NtGA2ox1基因。通过测序分析该基因的编码及全长序列,发现NtGA2ox1基因含有2个外显子和1个内含子,编码一条长度为379个氨基酸的序列。同源进化分析表明,该基因在多种植物中存在同源序列,特别是茄科植物。组织特异性表达分析发现,NtGA2ox1基因在烟草的各个生长阶段均有表达,其中,在花和根中表达量较高。同时,激光共聚焦显微镜结果表明,YFP-NtGA2ox1融合蛋白在细胞质和细胞核中有很强的荧光信号,表明NtGA2ox1蛋白很可能定位于细胞核和细胞质中。本研究为进一步研究赤霉素调控烟草侧枝发育提供了理论依据。
高分辨率熔解曲线HRM在SNP检测中的应用
王冬梅;李俊;杨红敏;石德顺;刘庆友;自然界生物具有丰富多样性,其本质在于DNA序列的多样性,单核苷酸多态性(SNP)是DNA序列多样性的基本单位,亦为生物进化和选择的动力源。越来越多的研究表明,SNP与人类的疾病、动植物的生长性状显著相关,对SNP的检测亦逐渐成为疾病检测和生物分子育种的重要手段。与传统的SNP检测技术相比较,高分辨率熔解曲线(HRM)具有高通量、高灵敏度、高特异性、快速、操作简单和重复性好的特点,能够快捷、有效筛查生物群体中的SNP位点,将逐渐成为SNP检测的主流技术。本文对HRM原理、方法、特点和应用进行综述,以飨读者。
急诊科护士正念度与心理弹性和职业倦怠的相关性分析
张燕;王爱红;崔静;李姝;为了探讨急诊科护士正念度与心理弹性和职业倦怠的相关性,本研究采用整群抽样法对34名急诊科护士进行问卷调查,所有护士均接受一般状况调查表、五因子正念度问卷(FFMQ)、Conner-Davidson心理弹性量表(CD-RISC)简化版和职业倦怠问卷修订版(MBI-GS)调查。结果表明,急诊科护士情绪耗竭、去人性化、个人成就感的得分分别为(16.25±8.27)分、(16.84±9.17)分、(26.83±9.05)分。急诊科护士FFMQ得分(99.91±8.14)分,项目均分(2.56±0.57)分。急诊科护士CD-RISC得分(69.14±7.43)分,项目均分(2.77±0.54)分。初步结论表明,急诊科护士职业倦怠感严重,正念度与急诊科护士的心理弹性呈正相关,与职业倦怠感呈负相关,通过正念训练提高心理弹性可影响急诊科护士的职业倦怠感。