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生酮饮食对高脂诱导的肥胖小鼠的糖脂代谢及肠道菌群的影响
李月;张晨虹;本研究探究了生酮饮食对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的糖脂代谢及对肠道菌群的影响。肥胖小鼠进行生酮饮食干预后，小鼠的体重、脂肪重等指标得到显著改善，但改善效果不及均衡的正常饮食，而且葡萄糖耐受性完全未改善。另外，基于Bray-Curtis距离的主坐标分析表明生酮饮食干预显著改变了肥胖小鼠的肠道菌群的结构和组成。通过建立稀疏偏最小二乘判别分析模型，我们鉴定出了66个响应生酮饮食干预的肠道菌群的具体扩增子序列变体(amplicon sequence variant, ASV)。其中，生酮饮食与均衡的正常饮食一致，降低了17个受高脂饮食扰动且与肥胖及糖脂代谢紊乱相关指标显著正相关的ASV的丰度。然而，仅均衡的正常饮食恢复了其余14个受高脂饮食扰动且与肥胖及糖脂代谢紊乱相关指标显著相关的ASV的丰度。此外，生酮饮食特定地降低了3个与肥胖及糖脂代谢紊乱相关指标显著负相关、提高了6个与肥胖及糖脂代谢紊乱相关指标显著正相关的ASV的丰度。这些发现提示采用生酮饮食进行减重不应忽视其可能带来的健康风险，需要遵从医生建议谨慎选择。
微RNA在恶性胸膜间皮瘤发生发展中的作用机制研究进展
赵丹;普元倩;熊伟;微RNA(microRNA, miRNA)是近年来发现的最短的内源性非编码RNA(non-coding RNAs, ncRNA)之一，普遍认为其通过调节信使RNA(messenger RNA, mRNA)表达水平来发挥作用，主要功能体现在参与调节生物个体发育、细胞增殖与分化、肿瘤的发生发展等多种病理和生理过程中。miRNA在调控癌基因、抑癌基因的表达和信号通路的活性过程中以及在恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma, MPM)发生和发展中发挥着重要的作用。本综述对miRNA的生成和miRNA的功能及在MPM发生发展过程中发挥促癌作用和肿瘤抑制作用的相关miRNA进行总结和归纳，以期为MPM的临床诊断以及治疗提供理论参考。
腰腹肌运动联合超声波对非特异性下腰痛的治疗效果及机制
庞雅静;罗筱;为了解腰腹肌运动联合超声波治疗的效果,本研究对腰腹肌运动联合超声波治疗非特异性下腰痛进行了探讨。研究显示,治疗4周后,腰腹肌运动+超声波治疗组的疼痛评分(0.73)显著低于超声波治疗组(1.22)(p<0.05)。腰腹肌运动+超声波治疗组的立位体前屈活动幅度(2.35 cm)显著低于超声波治疗组(6.23 cm)(p<0.05)。腰腹肌运动+超声波治疗组的屈伸肌总功和屈伸肌峰值力矩比显著高于超声波治疗组(p<0.05)。腰腹肌运动+超声波治疗组的Oswestry功能障碍指数问卷表(ODI)评分显著低于超声波治疗组(p<0.05)。治疗4周后,腰腹肌运动+超声波治疗组的血清超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平显著高于超声波治疗组,而丙二醛(MDA)水平显著低于超声波治疗组(p<0.05)。为了进一步考察运动联合超声波疗法对下腰痛的治疗机制,本研究建立了完全弗氏佐剂诱导的腰椎间盘退变大鼠模型。采用阿利新蓝染色检测大鼠椎间盘纤维环区和髓核区蛋白多糖的水平,并采用免疫组化染色检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的表达,发现运动联合超声波治疗可明显提高大鼠蛋白多糖、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖水平。本研究表明,与超声波治疗相比,腰腹肌运动联合超声波治疗可更大程度地降低非特异性下腰痛患者的疼痛,提高肌肉功能和腰椎功能,增强血清抗氧化能力,并减少氧化应激损伤。此外,该联合疗法可明显提高腰椎间盘退变大鼠椎间盘中的蛋白多糖、Ⅱ型胶原和蛋白聚糖水平。
EuFPS基因表达载体构建及对杜仲遗传转化的研究
赵丹;赵德刚;李岩;本实验用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切植物表达载体pSH737和含有目的基因的pUC-FPS,定向连接得到重组质粒pSH-FPS,将其导入农杆菌EHA105。采用农杆菌介导法对杜仲进行遗传转化,研究了卡那霉素(kanamycin,Km)浓度、预培养时间、菌液浓度及侵染时间、乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)浓度、共培养时间等对杜仲遗传转化效率的影响。结果表明,选择无菌苗苗龄15d的杜仲下胚轴,卡那霉素浓度50mg/L,农杆菌浓度OD600值0.30.6,侵染时间8min,侵染时菌体重悬液中添加50μmol/L乙酰丁香酮,共培养时间3d,抗性芽的获得率最高。对再生植株进行GUS检测发现有45%的植株呈阳性。
山药组织总RNA提取方法的比较与分析
覃芳;王军民;何海旺;何龙飞;李创珍;韦本辉;何虎翼;甘秀芹;采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。
金樱子提取物中多糖的体外抗肿瘤活性研究
黄俞龙;刘焱;多糖是药用植物金樱子所含有的数种主要生物活性物质之一,其具有多种生物活性,厘清该成分的作用效应具有重要意义。本文通过将黔产金樱子制备为金樱子粉末、分离纯化得到活性成分金樱子多糖;采用磺酰罗丹明染色法测定其对人肝癌细胞BEL-7402以及人正常肝细胞HL-7702增殖的影响并比较。发现金樱子提取物中所存在的多糖类化合物对体外培养的人肝癌细胞BEL-7402的增殖具有一定抑制作用,其半数抑制浓度为(12.43±1.95)μmol/L;且对体外培养的人正常肝细胞HL-7702的毒性较低,其半数抑制浓度为(31.04±3.68)μmol/L。初步证明金樱子提取物中含有的多糖类化合物具有一定的体外抗肿瘤活性,作为低毒性的天然提取物,具有广阔的抗肿瘤前景。
二穗短柄草(Brachypodium distachyon)BdCO基因调控开花的转录组学分析
杨龙姣;路雪萍;童伟杨;马培杰;罗文举;陈才俊;王小利;CONSTANS(CO)是植物光周期诱导开花途径中的关键基因之一。为探究BdCO在光周期途径中的分子调控机制，本研究对野生型二穗短柄草(Brachypodium distachyon)Bd21植株、过表达BdCO基因型二穗短柄草(CO＿OX)植株和BdCO基因敲除型二穗短柄草(CO＿A3)植株进行转录组测序分析，对差异表达基因进行GO和KEGG功能富集分析，最后观察三种植株的开花表型。结果表明，对比Bd21 vs CO＿OX和Bd21 vs CO＿A3的基因表达量，分别检测到1 382个和773个差异表达基因；GO功能富集分析发现，Bd21 vs CO＿OX的差异表达基因主要富集在小核仁核糖核蛋白复合物、 snoRNA结合和rRNA处理中，Bd21 vs CO＿A3的差异表达基因主要富集在类囊体、色素结合和光合作用中；KEGG通路富集分析发现，Bd21 vs CO＿OX的差异表达基因主要富集在植物激素信号转导、真核生物中的核糖体生物发生、光合作用-天线蛋白和昼夜节律-植物等通路，Bd21 vs CO＿A3的差异表达基因主要富集在MAPK信号通路-植物、真核生物中的核糖体生物发生和光合作用-天线蛋白等通路；在长日照条件下，CO＿OX植株的开花时间比野生型Bd21的提前约1.90 d, CO＿A3植株的开花时间比野生型Bd21的延迟约7.92 d。综上，BdCO影响光周期途径相关基因的表达，同时影响二穗短柄草的开花时间，说明BdCO在二穗短柄草的光周期途径调控开花的过程中发挥重要作用。
一种适用于双向电泳分析的高效真菌线粒体提取及蛋白质制样方法
密克;王金子;纪水养;陈琦;陈保善;用液氮冷冻研磨法破碎真菌菌丝细胞,通过差速和蔗糖密度梯度离心分离纯化板栗疫病菌线粒体,所得线粒体产率(质量比)约为1/104。电子显微镜观察和蛋白印迹表明,所制备的线粒体完整性好,没有检测到其它细胞成分的污染。使用膜蛋白裂解液溶解线粒体制备蛋白样品,将蛋白样品200μg上样于pH3~10,24cm的非线性胶条进行等电聚焦,电聚焦后再进行第二向SDS-PAGE电泳分离,经银染获得重复性好、背景清晰、分辨率高(680±15个蛋白质点)的凝胶图谱。随机选择10个蛋白质点进行质谱分析,9个获得有效注释,均为线粒体特异性蛋白质,表明所制备的蛋白样品非常适合双向电泳分析及其后续的质谱鉴定。
失水对板栗种子超微结构与生理变化及萌发的影响
韩彪;张萍;郭素娟;董昕;李文清;解孝满;本研究以板栗(Castanea mollissima)种子为材料，测定不同失水状态下萌发率和成苗率；利用石蜡切片和植物组织染色技术，观察胚轴显微结构和细胞中多糖及蛋白质变化，利用电子扫描显微观测胚轴超微结构变化。实验结果显示，当含水量降至30%以下，发芽率和成苗率开始迅速下降。胚轴中胚芽细胞较大且排列松散，胚根细胞排列更加密集、整齐。胚轴显微结构和超微结构均显示含水量30%的胚轴出现显著的细胞质壁分离，含水量10%的胚轴细胞质发生严重皱缩，并出现大量细胞降解。细胞中多糖和蛋白质随含水量降低呈现先聚集后分解的现象。板栗种子具有较强的脱水敏感性，细胞在失水过程中分解多糖和蛋白质以抵御脱水伤害，含水量降至10%会导致板栗胚轴细胞质严重皱缩和出现细胞降解现象，这可能是板栗种子脱水致死的主要原因之一。
薯蓣皂苷通过调控SLC7A11/GPX4信号通路诱导HepG2肝细胞癌细胞铁死亡
滕丽娟;梁玉琼;李雪锋;黄庆;温如燕;黄娟娟;雷雪;宋子怡;李豫柏;本研究旨在研究薯蓣皂苷(dioscin, DIO)对Hep G2肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)细胞铁死亡的影响及其分子机制。在体外实验中,用DIO干预Hep G2细胞48 h,检测细胞增殖能力、线粒体形态、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、二价铁离子(Fe2+)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平;并利用Western blot分析溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11, SLC7A11)/谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4, GPX4)及转铁蛋白受体(transferrin receptor, TFRC)信号通路关键蛋白表达差异。结果显示,与对照组比较, DIO组细胞存活率显著下降(P<0.01),且细胞出现线粒体体积缩小,嵴数量减少;与对照组相比, Fe2+、 MDA和ROS水平显著升高(P<0.01), SLC7A11、 GPX4水平显著下调(P<0.01), TFRC水平显著上调(P<0.01);采用铁死亡抑制剂Lip-1(liproxstatin-1)处理细胞,与DIO组相比, DIO+Lip-1组细胞Fe2+、 MDA和ROS水平下降(P<0.01), SLC7A11、 GPX4水平显著上调(P<0.01), TFRC水平显著下调(P<0.01)。综上,DIO在体外能够诱导Hep G2细胞发生铁死亡,其机制与抑制SLC7A11/GPX4通路蛋白表达,进而调控脂质过氧化,最终诱导HCC细胞铁死亡有关。该研究结果为DIO作为HCC的临床补充治疗药物提供了理论依据。