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LAD1促进食管鳞状细胞癌发生发展及其分子机制
谭劲松;熊黎;张若兰;孙姗;杨航;潘英杰;冯刚;宋桂芹;刘康;本研究旨在揭示锚定细丝蛋白(ladinin-1,LAD1)对食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。对ESCC组织及癌旁组织进行转录组测序并结合生物信息学在线网站分析,发现LAD1在ESCC组织中高表达,通过RT-qPCR验证LAD1在ESCC细胞系中的表达。收集31例ESCC患者的癌组织和对应癌旁组织标本,用免疫组织化学染色检测LAD1在ESCC组织中的表达并分析LAD1与ESCC组织病理特征的相关性。利用siRNA敲低KYSE-30和KYSE-150细胞中LAD1的表达,通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕愈合实验、Transwell实验、流式细胞术检测ESCC细胞功能的变化。UCSC和JASPAR在线网站预测可能调控LAD1的上游转录因子(transcription factors,TFs),并通过RT-qPCR和免疫组织化学染色验证其在ESCC细胞系中的表达,最后采用RT-qPCR实验和双荧光素酶实验验证转录因子与LAD1的调控关系。结果显示,相比于HET-1A细胞,LAD1在KYSE-30和KYSE-150细胞中高表达(P<0.01或P<0.001),与转录组测序结果一致。免疫组化结果显示,LAD1在ESCC中高表达并与病理分化程度呈负相关(P<0.01或P<0.001)。敲低LAD1抑制ESCC增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡(P<0.01或P<0.001)。UCSC和JASPAR在线网站预测结合RT-qPCR实验和免疫组织化学染色推测KLF5、EHF、ELF3可能是LAD1的上游转录因子,RT-qPCR实验和双荧光素酶实验进一步验证LAD1可能受到KLF5、EHF、ELF3的调控。本研究提示,LAD1在ESCC细胞和组织中高表达,并与病理分化程度相关联,敲低LAD1抑制ESCC细胞增殖、迁移、侵袭能力,促进细胞凋亡,KLF5、EHF、ELF3是调节LAD1的上游转录因子。
微小RNA(microRNA)在恶性胸膜间皮瘤发生发展中的作用机制研究进展
赵丹;普元倩;熊伟;微小RNA(microRNA,miRNA)是近年来发现的最短的内源性非编码RNA(non-coding RNAs, ncRNA)之一,普遍认为其通过调节mRNA表达水平来发挥作用,主要功能体现在参与调节生物个体发育、细胞增殖与分化、肿瘤的发生发展等多种病理和生理过程中。miRNA 在调控癌基因、抑癌基因的表达及信号通路的活性过程中,以及在恶性胸膜间皮瘤(malignant pleural mesothelioma, MPM)发生和发展中发挥着重要的作用。本综述对miRNA的生成和miRNA的功能,及在MPM发生发展过程中发挥促癌作用和肿瘤抑制作用的相关miRNA进行总结和归纳,以期为MPM的临床诊断以及治疗提供理论参考。
粟负泥虫成虫触角转录组及气味结合蛋白基因家族分析
刘佳;曹艺轩;白辉;王永芳;马继芳;刘磊;董志平;李志勇;粟负泥虫(Oulema tristis)是谷子上的重要害虫,对谷子的产量和品质均构成了严重威胁。气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)作为昆虫嗅觉识别系统中与气味分子结合的重要气味结合蛋白,在成虫定位寄主植物及交配行为中发挥着重要作用。本研究通过转录组测序,构建了粟负泥虫成虫触角转录组数据库,挖掘粟负泥虫成虫触角中潜在的OBPs家族基因,并对其理化性质、保守基序、系统发育及表达量进行了分析。结果表明,得到了一个准确性高、拼接完整度好、且功能注释较好的高质量的触角转录组数据库。共鉴定出32个OBPs,其编码92~184个氨基酸,蛋白分子的质量为10.07~21.19 kDa。不同分支上OBPs的Motif组成有所差异,但位于同一个分支上的OBPs具有相同的Motif组成。32个OBPs在整个进化树上分布,且相对集中,与光肩星天牛(Anoplophora glabripennis)、灭字脊虎天牛(Xylotrechus quadripes)和苹果小吉丁(Agrilus mali)存在多个直系同源基因对。筛选到了12个在成虫触角中高表达的基因,其中,OtriOBP9基因的相对表达量最高,在雄虫触角中表达量显著高于雌虫,可能与雄虫寻找配偶有关,实时定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)的结果与转录组数据一致。本研究为进一步探究粟负泥虫OBPs的功能奠定了基础,同时也为后续开发基于嗅觉行为调控的绿色防控技术提供了重要的理论依据。
水稻OsDOF23的结构功能及其互作蛋白的初步分析
彭雪艳;沈敏;徐道博;刘云峰;苏元;水稻(Oryza sativa L.)OsDOF23是植物特异性转录因子DOF(DNA binding with one finger)蛋白家族的一员,但其具体的生物学功能不明。因此,本研究以OsDOF23为研究对象,预测了OsDOF23蛋白的理化性质和结构特性,分析了OsDOF23基因的组织表达图谱,及其在水稻群体中的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP)和插入缺失标记(Insertion-Deletion, InDel)。此外,成功克隆并在大肠杆菌中表达纯化了OsDOF23蛋白的C末端,并以其为抗原制作了OsDOF23的多克隆抗体,用于后续的免疫沉淀实验。经免疫沉淀和液相色谱串联质谱技术检测分析从水稻总蛋白中得到与OsDOF23共沉淀的蛋白质组信息。经筛选得到37个可能与DOF23互作的蛋白,对这些蛋白进行功能富集分析发现有17和15个蛋白分别富集在蛋白质代谢和运输功能方面,从分子功能来说,其主要富集于核酸结合活性和转运活性方面。这些结果表明OsDOF23蛋白可能通过与蛋白质代谢、核酸结合和转运等相关功能蛋白互作发挥其生物学功能。