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当归多糖通过上调VEGF抑制细胞凋亡
刘永升;魏梅;宋春梅;李敏;杨曼;曹泽龙;刘刚;郑明奇;本研究旨在探讨当归多糖减轻糖尿病缺血再灌注(I/R)诱导大鼠心肌细胞凋亡的作用机制。通过构建糖尿病I/R大鼠模型,再将大鼠随机分为4组(n=10):假手术组(Sham)、糖尿病I/R组(I/R)、I/R+10 mg/kg当归多糖组(I/R+ANG)、I/R+10 mg/kg当归多糖+15μg/kg阿柏西普组(I/R+ANG+AF);通过TTC染色法分析不同实验组大鼠心肌梗死面积差异;使用ELISA试剂盒分析当归多糖干预对I/R大鼠心肌酶水平和氧化应激反应的影响;借助TUNEL/DAPI双重染色分析各组大鼠心肌细胞凋亡情况;通过Western blotting检测当归多糖对血管内皮生长因子A (VEGFA)蛋白表达的影响。TTC染色检测结果表明,与糖尿病I/R组相比,当归多糖可显著减少糖尿病I/R大鼠心肌梗塞面积(p<0.05)。ELISA检测结果显示,与I/R组相比,当归多糖显著降低了糖尿病I/R组大鼠心肌酶——LDH和CK血清水平(p<0.05),并降低TNF-α(p<0.05)、IL-6 (p<0.05)水平,以及上调SOD活性(p<0.05)。TUNEL/DAPI双重染色镜检观察到当归多糖组的TUNEL阳性心肌细胞百分比显著低于I/R组(p<0.05);蛋白免疫印迹分析表明,与假手术组相比,在糖尿病I/R大鼠中检测到p-eNOS蛋白表达下调;而与I/R相比,当归多糖显著减轻了I/R对p-eNOS蛋白表达的抑制作用;与I/R组和阿柏西普组相比,当归多糖处理组的Caspase-3活化水平较低(p<0.05)。而VEGF抑制剂——阿柏西普处理均明显减轻上述当归多糖在糖尿病I/R大鼠中的所有有益作用。当归多糖通过减轻糖尿病I/R大鼠的氧化应激以及炎症反应,以及上调VEGFA表达和抑制Caspase-3活化来减弱糖尿病缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡,从而在大鼠体内发挥心脏保护作用。
温度、pH、溶氧对添加植物乳杆菌构建生物絮凝系统的影响
王世亨;谭洪新;罗国芝;孙大川;生物絮凝技术和微生物制剂在水产养殖业中广泛应用,但向生物絮凝系统中添加益生菌最优条件研究甚少。本试验采取L9(33)安排3因素3水平关于溶氧(厌氧<0.5 mg/L,有氧>5 mg/L,厌氧-有氧交替)、pH (5.5, 7, 8.5)、温度(25℃, 30℃, 35℃)正交试验,开展35 d以植物乳杆菌为添加剂培养生物絮团试验,通过比较三态氮的变化情况、脱氢酶活性(dehydrogenase activity, DHA)及微生物种群结构,得出以植物乳杆菌为添加剂培养生物絮凝的最佳工艺。结果表明:在有氧、pH值8.5、30℃时,生物絮凝培养用时最短,为13 d,生物脱氮效率高;温度和溶氧对脱氢酶活性有显著性影响,25℃,厌氧-好氧交替,pH值7条件下培养的生物絮团脱氢酶活性最高;微生物群落结构分析表明生物絮团中主要为变形菌门(>70%),其次为拟杆菌门;植物乳杆菌在有氧、35℃、pH值5.5条件下丰度最高,为1.8%。综合实际生产,添加植物乳杆菌构建生物絮凝系统最佳条件为30℃、p H值7、有氧条件(DO>5 mg/L)。
‘西伯利亚’百合LiJAR1基因的克隆及表达分析
王浩楠;付宇辰;马波;张茜;胡增辉;冷平生;茉莉酸类物质(Jasmonates, JAs)是一类在植物体内广泛存在的激素，在植物次生代谢产物合成中起着重要的调控作用。花香作为植物重要的挥发性次生代谢产物，受到JAs信号的影响。为探究LiJAR1在百合单萜类挥发物合成中的作用，本研究以东方百合‘西伯利亚’(Lilium‘Siberia’)为试验材料，克隆LiJAR1基因，对其序列进行生物信息学分析，并通过荧光定量(RT-qPCR)技术进行时空表达分析。结果表明，LiJAR1基因全长1 743 bp，编码580个氨基酸，具有典型的GH3特征结构域。LiJAR1相对表达量随着花朵的逐渐开放至盛开期而逐渐升高，转入衰败期开始降低。LiJAR1基因在内花被片中表达量最高，其次是叶和根，该基因在花柱、花丝、子房、花药中的相对表达量较低。本研究分析了LiJAR1基因的蛋白质结构功能，明确了该基因的表达模式，为后续研究其在百合单萜类挥发物释放中的信号作用奠定了基础。
Tn5表达与纯化及对ZF4细胞DNA的酶活力测试
富伟康;姜蓬垒;刘玮;韩兵社;张俊芳;转座酶因其能够插入目的片段的能力正受到越来越多的关注,经过改造的高活性转座酶可用于标记DNA具有较大的应用价值,如ATAC-seq (Assay for transposase-accessible chromatin using sequencing)以及TrAC-looping (Transposase-mediated analysis of chromatin looping)等染色质高级结构捕获实验,使用高活性转座酶为染色质开放区DNA或存在染色质相互作用的片段加上标记从而分离出目的片段。天然转座酶普遍活性较低,缺乏实际应用价值,而经过改造的高活性转座酶因其可能导致的致死突变,对宿主具有较大毒性,难以制备。本研究优化了高活性转座酶Tn5的原核表达以及纯化方法,将已转化pet15b His6Tn5质粒的改良型工程菌BL21-Gold (DE3)以及毒性蛋白诱导条件进行原核表达,借助高活性转座酶Tn5带有的His tag标签进行纯化,通过Western blotting鉴定了纯化所得蛋白,并使用考马斯亮蓝染色测定了目的蛋白浓度采取在标准反应条件下与斑马鱼ZF4细胞基因组DNA反应的方法,测试了纯化所得Tn5的活性。本研究为进一步探测ZF4细胞基因组的三维结构提供了研究基础。
环境因子对土壤微生物产生和还原N_2O过程的影响
朱莹;田浩;王芸;杨柳青;张晓君;探究环境因子对土壤微生物反硝化气体产生的影响,选取培养温度、氧气含量、亚硝酸盐含量、葡萄糖含量、p H值、Cu2+含量6个因素,分别设计3个水平,设计7因素3水平一共18组的正交实验,对土壤有机物含量和培养条件进行调控,在密闭环境下进行培养,同时监测顶空气体中反硝化气体含量,连续监测10 d,随后对土壤中氧化亚氮还原酶基因nos Z进行定量PCR检测。培养实验显示在18组条件中一共出现了3种的反硝化气体产生类型,分别为快速产N2类型、N_2O累积类型和无气体产生类型,表明环境条件的差异导致了土壤反硝化微生物不同的产气过程。对定量PCR的方差分析显示单个环境因素并没有对nos Z基因拷贝数产生显著影响,表明反硝化气体产生的差异并不是通过影响nos Z基因拷贝数而产生的。
黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)全基因组微卫星分布特征分析
徐杰杰;郑翔;李杰;尹绍武;王涛;本研究利用NCBI上已公布的黄颡鱼全基因组测序结果,使用MISA软件对黄颡鱼全基因组的微卫星进行筛选并分析;结合MISA文件和基因组gff注释文件通过编写脚本定位微卫星在基因组的位置,并对外显子区含有微卫星的基因进行GO注释和KEGG富集。在黄颡鱼基因组713 810 725 bp序列中,共筛选出418 550个完整型的微卫星,其长度为12 974 321 bp,占基因组序列总长度的1.8%,相对丰度为586个/Mb。在1～6不同碱基重复类型微卫星中,二碱基重复数目最多,共173 177个,占微卫星总数的41.38%。然后依次是单碱基(40.26%)、四碱基(9.37%)、三碱基(7.63%)、五碱基(1.15%)和六碱基(0.21%)。基因组中重复数目最多的10种微卫星类别依次为T、A、AC、TG、GT、CA、TC、TA、AG和AT。同时通过对基因组微卫星进行定位,16 381个微卫星定位在基因外显子上,并分布在3 853个基因上。GO注释结果显示注释到分子功能的基因数目最多,富集前10的条目主要与电压门控钠通道复合物、电压门控钠通道活性和蛋白去磷酸化有关。KEGG富集分析显示共富集到21个通路,其中Hippo信号通路最为显著。研究结果为今后黄颡鱼微卫星标记的开发以及微卫星的定位功能等提供了一定的理论基础。
三种不同颜色果实的红豆杉树皮中紫杉醇含量比较研究
曹殿洁;张国升;卫强;刘志;吴甜甜;徐帅;郝陈陈;本研究比较了三种安徽宣城采集的不同颜色果实的红豆杉树皮中紫杉醇的含量。利用三氯甲烷料液比1:5,回流提取2 h,活性炭脱色后制备供试品溶液。采用HPLC法,Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水-乙腈(24:30:36)为流动相,在227 nm波长下检测紫杉醇含量。检测发现红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 564 mg/g,黄色果实红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 785 mg/g,金黄色果实红豆杉树皮中紫杉醇含量为0.000 703 mg/g。安徽宣城发现的黄色果实红豆杉和金黄色果实红豆杉树皮中的紫杉醇含量比红豆杉高,初步明确了黄色果实红豆杉的药用价值,为进一步发掘其产品价值提供了依据。
赣南油茶壳活性炭制备及对重金属元素铅和锰的吸附性分析
张剑;李君蔚;李银保;油茶壳因含有大量的纤维素而用于制备活性炭。本研究以油茶壳为原料,使用碳酸钾活化,在马弗炉中制备活性炭,并以亚甲基兰和碘吸附量作为评价指标考察了制备的活性炭产品吸附能力并优化了油茶壳活性炭的制备工艺。以重金属元素铅和锰为吸附元素,分别考察了制备的油茶壳活性炭对重金属元素铅和锰单一元素和混合元素的吸附能力。实验结果表明,油茶壳活性炭具有良好的吸附性能,对水中单一元素铅的吸附量为1 100μg/g,对单一元素锰的吸附量为250μg/g,对这两种混合元素吸附作用时,铅会竞争性地占据吸附位点,致使锰元素吸附量非常少。通过对比实验证明,油茶壳活性炭对亚甲基兰的吸附和碘吸附量均大与椰壳活性炭,对水中铅元素的吸附作用大于锰元素的吸附作用,作为新型吸附剂,该活性炭能用于水中重金属元素特别是铅元素的吸附。
一株野生离褶伞菌株的ITS序列分析及其生物学特性的研究
郑秋霞;蒋木杉;应顺秋;吴小平;本研究以1株野生离褶伞属真菌为研究对象,通过扩增rD NA-ITS序列并测序分析后确定该野生菌株为暗褐离褶伞(Lyophyllum loricatum)。进一步对该菌株进行生物学特性研究,结果表明,其菌丝可生长温度范围为10~35℃,最适生长温度为25℃,可生长的pH范围为4.09.5,最适生长pH为5.5,最适生长碳源为麦芽糖,最适生长氮源为蛋白胨,最适生长因子为肌醇。本研究对暗褐离褶伞菌株的初步探索,为暗褐离褶伞的驯化栽培提供了重要的理论基础。