下载排行
草酸青霉转录因子POX03446对生淀粉酶产量调控的初步研究
张美远;廖桂艳;宁远妮;潘杰清;王凯;张璐;王辰颖;万旭东;赵帅;冯家勋;生淀粉酶可以在淀粉糊化温度以下的温度下直接降解生淀粉,具有巨大应用价值。丝状真菌生淀粉酶的产生受转录因子的严格调控。但是,草酸青霉(Penicillium oxalicum)中生淀粉酶产生的调控机制仍不清楚。前期工作中,通过比较基因组学获得了草酸青霉HP7-1中调控生淀粉酶产量的候选调控基因集。本研究以草酸青霉ΔPoxKu70为出发菌株,用同源重组技术敲除了其中一个候选调控基因POX03446,获得了缺失突变株ΔPOX03446。在可溶性淀粉培养条件下,与出发菌株ΔPoxKu70相比,转接后第2天,ΔPOX03446的生淀粉酶产量显著下降29.8%～40.3%(p<0.01;Student's t test);转接后第4天,生淀粉酶产量显著下降14.6%～29.7%(p<0.01;Student's t test),表明基因POX03446正向调控草酸青霉生淀粉酶的产生。NCBI BlastP比对分析显示POX03446与草酸青霉调控木聚糖酶基因和纤维素酶基因表达的转录因子PoXlnR一致性为46%。这是第一次报道POX03446调控草酸青霉生淀粉酶的产生。
微量元素氨基酸螯合物对生长猪生产性能和血清微量元素含量的影响
夏中生;刘丹;李玉艳;龚艳琴;陈嘉宇;曹荣健;赵峰;用微量元素氨基酸螯合物按不同比例替代生长猪饲粮中无机微量元素,研究其对生长猪生长性能和血清微量元素含量的影响。用0、12.5%、25.0%和37.5%的氨基酸螯合铁、铜、锌、锰分别替代基础日粮中的相应无机元素的0、25%、50%和75%,分4个处理,每处理3个重复,每个重复4只猪,实验期56 d。实验结果表明:添加微量元素氨基酸螯合物对生长猪的生长性能有一定的改善作用,与对照组(1组)比较,2、3、4组的平均日增重分别提高9.85%(P<0.05)、7.51%(P>0.05)、1.34%(P>0.05)饲料增重比(F/G)分别比对照组降低6.74%(P<0.05),7.45%(P<0.05),1.42%(P>0.05);血清中微量元素铁(F e)、锌(Zn)、铜(Cu)、锰(M n)含量比对照组均有所增加。微量元素螯合物替代无机元素的适宜比例为25%。
GmXTH22基因启动子序列的克隆及功能分析
孙铭阳;李永光;李文滨;利用PCR技术从大豆品种东农50基因组中分离得到了GmXTH22(glyma13g01150)基因启动子片段pGmXTH22,定向替换载体p BI121的CAMV35S组成型启动子,构建表达载体pBI121-pGmXTH22,驱动下游报告基因GUS基因表达,然后将pGmXTH22-GUS-nos切下连接到改造后的p CAMBIA3300中。在The Bio-Analytic Resource for Plant Biology(BAR)中分析GmXTH22的同源基因At XTH14的细胞与组织表达特异性和在不同逆境条件下的表达模式。利用Plant CARE在线启动子预测工具进行分析。利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了GmXTH22在冷处理下的表达模式。结果表明:At XTH14在细胞壁和根部原形成层表达量最高,并受到低温,盐胁迫等多种逆境诱导。GmXTH22启动子序列中含有多种典型的光、激素和胁迫诱导特异性表达元件。qRT-PCR结果证实GmXTH22的表达受冷胁迫抑制。
7种植物ALAD基因的生物信息学分析
龙芳;李绍鹏;李茂富;5-氨基乙酰丙酸脱水酶(δ-aminoaevulinic acid dehydratase,ALAD)是生物体所有四吡咯化合物生物合成所必需的酶。目前,GenBank共记载了39种绿色植物的ALAD基因。本文采用生物信息学方法对其中常用的模式植物拟南芥、玉米、小麦、大豆、苜蓿以及葡萄、菠菜等植物的5-氨基乙酰丙酸脱水酶基因的核苷酸及其编码的蛋白氨基酸序列、组成成分、导肽、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构、三级结构及功能域等进行预测和分析,并构建了5-氨基乙酰丙酸脱水酶蛋白家族的系统进化树。结果表明,这几种植物的开放阅读框都在1 290 bp左右,分子量为47 kD左右,等电点(pI)值为5.57.0之间,ALAD蛋白呈中性至微酸性。含量最丰富的氨基酸为Ala、Leu、Val、Arg、Ser、Gly、Pro和Asp。研究还发现这些植物5-氨基乙酰丙酸脱水酶肽链表现出明显的疏水区和亲水区,不存在信号肽,有叶绿体转运肽;可能存在跨膜结构域。蛋白质二级结构中最主要的结构元件是无规则卷曲和α-螺旋,含有5-氨基乙酰丙酸脱水酶的活性结构域、ALAD-PGBS-aspartate-rich保守结构域、舍夫碱残基结构域和一个镁离子结合位点结构域。核苷酸同源性比对结果显示,拟南芥5-氨基乙酰丙酸脱水酶基因与其它植物的同源性较高;进化分析结果表明这些植物5-氨基乙酰丙酸脱水酶基因被分为六个大类。本工作可为今后深入研究植物5-氨基乙酰丙酸脱水酶的结构特征和功能提供一定的依据。
可降解的非病毒基因载体的研究进展
谢丽娜;罗聪;王昌绚;陈韬;毕杨;选择合适的基因载体是基因治疗成功与否的一个关键环节,合适的基因载体应该具备较高转染效率,较好的组织相容性以及生物安全性等特点。相较于传统的病毒基因载体,非病毒基因载体具有低免疫原性,易于制备以及载药量大等特点,是较为理想的基因载体。而寻求可降解的非病毒基因载体可使其更为安全深入的应用到体内以及临床,意义重大。本研究就对常见的几种可降解的基因载体的转染效果及相关改性做一综述,为研究可降解非病毒基因载体的新方法提供新思路。
花粉管通道法介导的真菌耐盐基因转化拟南芥
郑鹏;谭德冠;孙雪飘;张家明;橡胶树内生真菌ITBB2-1具有很强的抗盐性,在培养基中添加2倍海水盐度的NaCl能显著促进菌落的生长。采用两种方法研究利用花粉管通道法将ITBB2-1耐盐基因导入拟南芥。多数耐盐转基因植株畸形,生长发育不正常。通过对一千两百余株转基因植株的筛选,获得了耐盐性显著提高、生长发育正常的转基因植株3个。对主要农艺性状统计分析发现,转基因植株叶片的长度、宽度和面积均比野生型植株小,差异达极显著水平。转基因植株SR3的角果长度仅为野生型的64.5%,SR1和SR2的角果长度与野生型无显著差异。本研究表明,在真菌耐盐机制尚未得到研究和耐盐基因尚未克隆的情况下,可以采用花粉管通道法将其耐盐特性导入高等植物中。
延龄草总皂苷对LPS诱导炎症大鼠的抗炎效果
王先丽;任丹;詹光杰;詹康;肖本见;为了探讨延龄草总皂苷对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导急性炎症大鼠的保护作用,将SD大鼠随机分成(2, 1, 0.5) g/kg剂量组、模型组、地塞米松磷酸钠(dexamethasone, DEX)对照组及空白对照组,每组10只。剂量组按(2, 1, 0.5) g·kg~(-1)·d-1延龄草总皂苷灌胃一次,模型组、空白对照组灌胃等量蒸馏水。连续灌胃5 d,末次灌胃0.5 h后,剂量组、模型组按200μg/kg腹腔注射LPS;DEX对照组连续灌胃4 d,第5天腹腔注射DEX (100μg/kg),0.5 h后按200μg/kg腹腔注射LPS,空白对照组注射等量生理盐水。末次注射LPS 8 h后,处死大鼠,检测碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、一氧化氮合酶(NOS)活性及总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、一氧化氮(NO)、白细胞介素6 (IL-6)、IL-10、IL-1β、IL-4、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、5-羟色胺(5-HT)、组胺(HIS)、环氧化物酶(COX-2)、前列腺素E2 (PGE2)含量。结果显示:(2, 1, 0.5) g/kg组ALP、AST活性及IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、HIS、COX-2、PGE2含量降低;(1, 0.5) g/kg组ALT活性降低;2 g/kg组NOS活性与NO含量降低,IL-10含量升高;(2, 1) g/kg组5-HT含量降低。延龄草总皂苷能有效降低LPS所致炎症大鼠ALP、AST、ALT、NOS活性及TC、TG含量,减少NO生成,降低IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、5-HT、HIS、COX-2及PGE2过量分泌、提升IL-10、IL-4含量,抗炎效果明显。
健康成年人肠道硫酸盐还原菌和丁酸盐产生菌的性别差异
冯舟;李敏;龙文敏;庞小燕;探究人体肠道内重要的功能菌——硫酸盐还原菌和丁酸盐产生菌在健康成年个体中的数量,并分析其与年龄、性别的关系。采集40名健康成年志愿者(男性:女性=1:1,年龄23~53岁)的粪便样品,采用试剂盒Invi Mag誖Stool DNA Kit联合Bead beating的方法提取粪便中细菌总DNA。通过定量PCR技术对总菌、硫酸盐还原菌以及丁酸盐产生菌的拷贝数进行定量检测。结果显示,40名健康成年人每纳克粪便DNA中含有的细菌总量为(9.22×106±7.35×106)个拷贝,硫酸盐还原菌拷贝数为(9.21×103±9.87×103),而丁酸盐产生菌拷贝数稍高于硫酸盐还原菌,为(2.68×104±3.08×104)。硫酸盐还原菌和丁酸盐产生菌的数量在不同个体间存在较大差异。Spearman相关分析显示三类基因的拷贝数与志愿者年龄无显著相关关系。硫酸盐还原菌和丁酸盐产生菌的拷贝数及其相对丰度存在显著的性别差异,表现在男性个体含有更少的硫酸盐还原菌(p<0.05)和更多的丁酸盐产生菌(p<0.01)。本研究揭示了硫酸盐还原菌和丁酸盐产生菌在健康成年人肠道内的数量,为进一步探究肠道菌群的性别差异提供了新的思路。
Thermotoga sp. KOL6来源GH1 β-葡萄糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化
盛玲玲;夏伟;吴敬;吴丹;葡萄糖苷酶是利用葡萄糖制备低聚龙胆糖的关键用酶,而高转糖苷活性和高耐热性是适合于低聚龙胆糖酶法制备用β-葡萄糖苷酶的理想特性。研究表明,GH1家族的β-葡萄糖苷酶具备高转糖苷活性的优势。因此,本研究认为噬热菌来源的GH1耐热β-葡萄糖苷酶是非常好的研究生产低聚龙胆糖的候选酶。为了满足β-葡萄糖苷酶的安全生产需要,本研究合成了热袍菌Thermotoga sp. KOL6来源的GH1家族的β-葡萄糖苷酶基因tsbgl,将其在Bacillus subtilis WS11中重组表达,并在摇瓶水平和3-L发酵罐水平上进行优化。结果表明,重组菌在TB培养基的基础上摇瓶发酵后的酶活可达到10.41 U/m L,之后在摇瓶水平上进行发酵优化,发现以15 g/L工业蛋白胨和5 g/L安琪玉米浆为组合氮源、5 g/L甘油为碳源、添加终浓度为1 mmol/L的Ba2+离子时,摇瓶发酵24 h,酶活力最高可以达到16.32 U/m L,是TB培养基摇瓶发酵酶活的1.56倍。依据摇瓶结果进行3-L发酵罐中的补料培养基的优化,确定葡萄糖为最优补料培养基,扩大培养后的酶活可以达到520 U/mL,是未优化前的49倍。本研究重组表达了耐热β-葡萄糖苷酶Tsbgl,并通过发酵优化有效提升了其在枯草芽孢杆菌中的发酵水平,为其食品级工业化生产及应用奠定了基础。
影响猪肉性状相关基因的研究进展
时永强;祝宇;王奇惠;曲伟杰;本综述旨在对影响猪肉质性状的相关基因进行介绍,掌握相关基因在国内外的研究动态,分析不同因素、基因对肉质性状的影响,以期在基因水平调控肉质品质提供理论参考。通过阅读大量的相关文献,作者对影响猪肉质性状的主效基因如氟烷基因(halothane gene)、酸肉基因(rendement napole);候选基因如脂肪酸结合蛋白(fatty acid-binding protein)、脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase)、瘦素(leptin)、脂联素(ADIPOQ);脂肪沉积过程中的关键调控因子如PPARγ因子、C/EBPs,三者的研究进展进行综述,为进一步指导实践,满足消费者的需求提供了一定的理论依据。